Calibrazione dell'AFC Izon Science per l'isolamento automatico di esosomi e vescicole extracellulari

Il campo delle vescicole extracellulari (EV) è in continua espansione, con applicazioni nella scoperta di biomarcatori, diagnostica rapida, potenziali candidati vaccini e come veicoli per la somministrazione di farmaci. Una delle principali sfide per la loro applicazione in un contesto clinico è trovare un metodo di isolamento EV scalabile che produca EV funzionali.

L'isolamento delle vescicole extracellulari tramite la combinazione delle colonne di esclusione dimensionale qEV di Izon e l'Automatic Fraction Collector (AFC) aumenta l'uniformità dei volumi di raccolta dei campioni contenenti EV, diminuisce il tempo di esecuzione sperimentale (consentendo una maggiore produttività del campione) ed elimina molte delle imprecisioni causate dalla raccolta manuale di veicoli elettrici. L'AFC offre agli utenti la possibilità di aumentare l'isolamento EV attraverso l'automazione di diversi passaggi, tra cui l'equilibrio, l'eluizione EV, la pulizia e la rigenerazione delle colonne.

L'AFC gestisce la raccolta del volume vuoto (volume totale della fase mobile nella colonna) differenziando automaticamente tra il volume vuoto e i volumi di raccolta del campione contenenti EV. Il volume vuoto non contiene EV e si raccoglie nel pozzetto centrale del carosello. La sua quantità dipende dal tipo di colonna qEV utilizzata. Una volta raccolto il volume vuoto, lo strumento inizierà a raccogliere un numero di volumi di raccolta del campione di un dato volume, determinato dall'utente attraverso l'intuitivo software AFC. I volumi di raccolta iniziale corrispondono alla Zona EV (zona blu in Fig. 1), mentre le frazioni successive corrispondono alla Zona Proteica (zona viola in Fig. 1) che può essere raccolta, se necessario.

Nel caso in cui si verifichino un gocciolamento continuo o un riempimento eccessivo / insufficiente delle provette di raccolta durante l'analisi dei campioni, il problema è da attribuire alla calibrazione dell'AFC.
La corretta calibrazione dell'AFC è vitale per la raccolta accurata dei volumi vuoti e dei successivi volumi di raccolta EV. È incluso con l'AFC un peso di 10 g per garantire la corretta calibrazione della cella di carico. Per un protocollo dettagliato sulla calibrazione, fare clic qui. Una calibrazione imprecisa porta a un riempimento difforme delle provette di raccolta dei campioni post qEV.