Come misurare in maniera precisa e affidabile le tue nanoparticelle (vescicole extracellulari, esosomi, ecc...) con la TRPS

 Come misurare in maniera precisa e affidabile le tue nanoparticelle (vescicole extracellulari, esosomi, ecc...) con la TRPS
Data di pubblicazione: 
Lunedì 26 Ottobre 2020

TRPS è l'unica tecnologia che fornisce con precisione la concentrazione di particelle per unità di volume, tramite la misura definita della dimensione delle particelle, dell'accurata distribuzione delle dimensioni delle particelle stesse e della carica superficiale. La qualità dei reagenti e la preparazione del campione sono importanti per ottenere dati di alta precisione. La qualità dei reagenti è vitale per un uso stabile dello strumento; reagenti di alta qualità producono un basso rumore di fondo, correnti di base stabili e rilevamento di particelle altamente stabile e sensibile. Al contrario i reagenti scaduti, con tracce di contaminanti o precipitati, aumentano notevolmente l'instabilità dei pori, a discapito dell'accuratezza dei dati misurati. Per essere sicuri di ottenere misurazioni TRPS di alta qualità, si consiglia di adottare le raccomandazioni e i protocolli di best practice forniti da Izon, con semplici e dettagliate istruzioni passo dopo passo. Clicca qui per maggiori informazioni.

I tre parametri più importanti a cui prestare attenzione quando si esegue una misurazione  con laTRPS sono:

  1. Baseline current
  2. Rate plot
  3. Calibration recording
La corrente di base (baseline) riflette la conduttività dell'elettrolita e fornisce informazioni sullo stato del nanoporo. Se le particelle sono state preparate nello stesso elettrolita, la conducibilità (o corrente in nA) dovrebbe essere simile. Sono accettabili variazioni della corrente di base entro il 5% tra le registrazioni successive. Qualsiasi cambiamento improvviso nella corrente di base al di fuori di questo intervallo suggerisce un blocco o una modifica parziale del nanoporo e deve essere controllato prima di procedere alla misurazione successiva. Un campione preparato male può causare problemi durante la misura, in particolare nel blocco parziale del nanoporo.
 
Se si verifica un blocco parziale durante una misura, è possibile sospendere la misura per evitare imprecisioni di misura e seguire il diagramma di flusso pensato per aiutare l'utente a ripristinare la baseline. La presenza di bolle d'aria e/o perdita di elettrolita nella parte superiore o inferiore della Fluid Cell può causare una deriva o fluttuazione della corrente di base. Fare riferimento alla Tabella 1 (immagine qui allegata) per le raccomandazioni su come stabilizzare la corrente di base.

La concentrazione di particelle viene misurata confrontando il gradiente del grafico della velocità della misurazione del campione con la misurazione della calibrazione. Il grafico della velocità deve mantenere un gradiente lineare per garantire la registrazione di dati di alta qualità come mostrato nella Figura 1 qui sotto. La stabilità del sistema è fondamentale per ottenere un grafico lineare e ciò può essere ottenuto grazie a un'adeguata preparazione del campione, facendo il possibile perché non vengano introdotti contaminanti. Nel caso di una  preparazione non adeguata, i grafici della velocità, che non saranno lineari, saranno seguiti da calcoli dimensionali e di concentrazione imprecisi.

Le spiegazioni e le raccomandazioni per correggere questo problema possono essere trovate qui.

È buona pratica eseguire una registrazione della calibrazione dopo ogni misurazione del campione; tuttavia, a condizione che i campioni non modifichino il nanoporo, è possibile registrare alcuni campioni in successione prima di registrare una calibrazione. Ad esempio, C1, S1, S2, C2, S3, S4, C3, ecc. (C = calibrazione, S = campione).
 
Visita il portale di supporto di Izon per ulteriori suggerimenti e raccomandazioni per le misurazioni di qNano e TRPS.

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